Wektory

 0    20 schede    magdapawlowska45
Scarica mp3 Stampa Gioca Testa il tuo livello
 
Domanda Risposta
Plazmidy bakteryjne 1
inizia ad imparare
=ds, koliste,=potrzebują enz. Gosp do repl i transkr =często geny korze dla gosp np. odp na antyb = poch od pMB1/ColiE1 (ori i przyległe sekwencje) =zwykle 1 replikon -mogą być przekaz do innych bakt podczas koniugacji
Plazmidy bakteryjne 2
inizia ad imparare
=markery selekcyjne odp na amplicyline(mają plazmid przeżyja dodanie antyb) =geny reporterowe – wizualnie rozróżnić bakt z plazm przez świecenie =syst ekspresji
Plazmidy bakteryjne najważniejsze elementy
inizia ad imparare
-gen markerowy (odporności) -miejsce klonowania -ori – origin of replication W posiewach redukcyjnych najlepiej uzywać pojedynczych kolonii gdyż są one najbardziej homologiczne.
Bakteriofag lambda
inizia ad imparare
- posiada główkę i ogonek Główka z kilku rozdajów białek zawiera wewnątrz jego genom – ok 50 kpz, cząsteczka dwuniciowa liniowa. Ogonek zbudowany z innych białek. – jest to rodzaj pasożyta
Cykl rozwojowy faga lambda cz1
inizia ad imparare
Przył się do b wykr maltozę u bakt. Wstrzyk DNA do jej wnętrza. Genom długie lepkie końce, zamyka się w kółko wew bakt, enzymy bakt je sklejają. Geny zaczynają działać
Cykl rozwojowy faga lambda cz2
inizia ad imparare
powst mRNA, b kapsydu, namn się wirus, do przepeł się kom i obumarcia
Cykl rozwojowy faga lambda cz3
inizia ad imparare
(szlak lityczny bo do lizy kom. Częściej wyk w bibli bo nie trzeba wycinać naszych pożądanych genów z genomu bakt, tylko mamy genom wirusa z naszym dokl fragm)(Może też zintegr się z chr. bakt i się z nim dzielić – szlak lizogeniczny)
Łysinka fagowa
inizia ad imparare
zdechłe bakterie i bakeriofagi. Brak zmetnienia bo brak rosnących zdrowych bakterii
Lambda jako wektor wady:
inizia ad imparare
• długi genom • za dużo miejsc restrykcyjnych (w tym w enach istotnych dla litycznego rozwoju) trudno wklonować • kapsyd nie pozwala na upakowanie cząstek większych niż 105% i mniejszych niż 78% genomu dzikiego faga lambda)
Lambda jako wektor usuwanie wad
inizia ad imparare
• usuwane środkowej części nieistotnej dla wzrostu litycznego (wektor tpu substytucyjnego) i wstawianie w o miejsce obcego DNA • mutowanie miejsc restrykcyjnych • wprowadzanie markerów genetycznych
Kosmidy
inizia ad imparare
zmod plazmidy z sekwencją cos umozliwiające pakowanie DNA do otoczki faga lambda (pusty ok 5 kpz) Pierwotnie przeznaczone do klonowania dużych fragmenów genomowego DNA
Kosmidy cechy 1
inizia ad imparare
• wektor posiada ori i geny odporności i bez insertu można go wytransformowac namnażać jak plazmid • wektor z insertem pakuje się do otoczki i transferuje się bakterie
Kosmidy cechy 2
inizia ad imparare
• selekcja na antybiotyku wzrost w postaci kolonii bakteryjnych • max 47 in33 kb (pojemność otoczki lambdy) • klonowanie trudniejsze niż lambda stosowany tylko w szczególnych przypadkach
Kosmidy stężenie
inizia ad imparare
Przy niskim c cz DNA w probówce jest większe p-stwo że cz zamkn się w postać kolistą. Jak większe to będą powstawały długie linearne cz przyp konkatamery. Dzięki sekwncjom cos możemy zmusić wpakowanie ich do kapsydu (jak mają dobrą długość)
Bakeriofagi jednoniciowe 1
inizia ad imparare
• jednoniciowe koliste DNA 6,4kb (M13 forma infeekcyjna) • możliwość otrzymania dużych ilości jednoniciowego dna (do sekwencjonowania, do robienia sond niciowo-specyficznych, mutageneza kierowana)
Bakeriofagi jednoniciowe 2
inizia ad imparare
• pakowanie podczas wyrzycania za kom gosp – otoczka układana wokół DNA nie ma ograniczenia wielkości kawałka pakowanego • ainfekowane bakerie z wirusem to rosną 2 x wolniej
Bakeriofagi jednoniciowe wzrost na podłożu
inizia ad imparare
Widzimy je jako mętne łysinki (ale troche mniej. Przez to że są obciążone wirusem to rosną 2 x wolniej
Fagmidy
inizia ad imparare
• połączenie cech plazmidów i fagów • namnażanie w postaci faga’
System fagigin 1
inizia ad imparare
Cz bakteriofaga z sekw cos na końcach. W środku ma sekw fagmidu plus baktryjne orii Zlinearyzowany wektor z lepkimi końcami. Zlepiamy go z naszym DNA i dostajemy fagmid i pakujemy go do główki.
System fagigin 2 Wysianie
inizia ad imparare
Może być wysiany gęsto na szalce, wyrosną łysinki i możemy go mocno upakować. W zalezności od szczepu bakt możemy zrobic różne rzeczy potem.

Devi essere accedere per pubblicare un commento.