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BIOL MOL 2 Liza alkaliczna
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Jak zniszczyć ścianę komórkową bakterii?
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Osad z komórek zawiesić w buforze z lizozymem
Jak zniszczyć błony komórkowe i zdenaturować białka?
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Dodać detergentu SDS w roztworze NaOH do osadu z komórek w buforze z lizozymem
SDS
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decylosiarczan sodu
Co robi odczyn zasadowy w r-r po dodaniu SDS w r-r NaoH?
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denaturuje DNA i rozpoczyna hydrolizę RNA (12,5 ph)
Czym się zobojętnia zasadowy roztwór?
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Dodaje się stężony roztwór octanu potasu
Co sprawia zobojętnienie zasadowego roztworu?
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Wytrąceniem zdenaturowanych białek i DNA chromosowego oraz większości SDS
Lizant z plazmidowym DNA co robi po zobojętnieniu?
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Łatwo renaturuje
Kiedy uzyskuje się lizant z plazmidowym DNA?
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po zobojętnieniu zasadowego roztworu i wirowaniu
Co ma lizant oprócz plazmidowego DNA?
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trochę RNA i białek
Ekstrakcja fenolowa
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Fenol lub mieszanina fenol-chloroform denaturuje pozostałe w lizancie białka (NAJCZYSTSZA METODA)
Co robią białka po ekstrakcji fenolowej w lizancie?
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denaturują, tworzą osad na granicy faz
Gdzie używa się wytrącania etanolem?
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przy RNA i przy DNA
Kiedy stosuje się wytrącanie etanolem?
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po ekstrakcji fenolowej
W czym rozpuszcza się osad po ekstrakcji fenolowej?
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w Tris-EDTA
Co trawi pozostałe zaniczyszczenia DNA po ekstrakcji fenolowej?
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rybonukleazę A
co robi EDTA?
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Niszczy Mg2+, które są potrzebne nukleazom i w ten sposób chroni DNA przed zanieczyszczeniem
Co jest najlepszą metodą do izolacji bardzo czystego, superhelikalnego DNA?
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Wirowanie w chlorku Cezu
Co wiąże mniej bromku etydyny? Superhelikalny DNA czy liniowe DNA? dlaczego?
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Superhelikalny DNA, bo ma większą gęstość
W czym jest CsCl?
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w bromku etydyny
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Vedi schede correlate:
BIOLOGIA MOLEKULARNA 1
BIOLOGIA MOLEKULARNA 2
Hybrydyzacja typu southern - biolmol2
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